Phospho-iTRAQ: Assessing Isobaric Labels for the Large-Scale Study Of Phosphopeptide Stoichiometry
Pieter Glibert, Paulien Meert, Katleen Van Steendam, Filip Van Nieuwerburgh, Dieter De Coninck, Lennart Martens, Maarten Dhaenens, and Dieter Deforce
J. Proteome Res. (2015) 14: 839–849
生物体中大约30%的蛋白是磷酸化的,因而深入细致地研究这一广泛的蛋白修饰行为对阐明多种多样的细胞学过程非常重要。然而许多实验流程都仅仅关注磷酸化肽段的富集以及后续运用非标定量或者标记定量的方法对磷酸化肽段的定量, 磷酸化的化学计量以及占据位点并没有考虑。
为了运用Phospho-iTRAQ方法测定磷酸化位点,肽段样品被分为两部分,其中一部分运用磷酸酶将磷酸位点去除。通过聚焦磷酸化肽段中没有修饰的组分,该方法避免了大部分磷酸化蛋白组学方法中,低离子化,肽段碎裂,富集效率对化学计量定量造成的不利影响。运用EGF刺激的Hela细胞裂解复合物,该技术在多种仪器平台上进行了验证。
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