Analyses of Histone Proteoforms Using Front-end Electron Transfer Dissociation-enabled Orbitrap Instruments
Lissa C. Anderson, Kelly R. Karch, Scott A. Ugrin, Mariel Coradin, A. Michelle English, Simone Sidoli, Jeffrey Shabanowitz, Benjamin A. Garcia and Donald F. Hunt
Molecular & Cellular Proteomics (2016), 15, 975-988
组蛋白是染色体中主要的蛋白成分,通过复杂的翻译后修饰、组蛋白突变以及蛋白降解,在基因表达的调控中发挥着主要功能。为了克服当前基于MS 技术,表征组蛋白中的一系列限制,本文作者利用改进的Orbitrap 仪器,开发了一种新的技术线路。
在Orbitrap仪器前安置一个试剂离子源,利用C-trap储存来源于多重迭代反应的碎片离子,研究者能够在很大程度上增强碎片离子流。碎片离子流经过有效聚集后,被转移至Orbitrap中进行测定。这一改进策略能够增强信号-噪声比,能够在与LC 匹配的时间轴上获取更高质量的图谱。
Hela细胞经丁酸盐处理后,研究者利用top-down LC/MS/MS技术,采用 ETD碎裂模式,对其中的组蛋白进行分析。几种特征性的组蛋白proteoforms 被鉴定,序列覆盖度最高达到81%,其中包括多种修饰,例如单氨基酸替换,甲基化以及乙酰化。另外,组氨酸H2A和H2B的截断形式也被表征,序列覆盖度高达93%。 |