Approach for identifying HLA-DR bound peptides from scarce clinical samples
Tina Heyder, Maxie Kohler, Nataliya K. Tarasova, Sabrina Haag, Dorothea Rutishauser, Natalia V Rivera, Charlotta Sandin, Sohel Mia, Vivianne Malmstrom, Asa M. Wheelock, Jan Wahlstrom, Rikard Holmdahl, Anders Eklund, Roman A. Zubarev, Johan Grunewald and Anders Jimmy Ytterberg
Molecular & Cellular Proteomics (2016) published online July 24, 2016
在免疫肽组(immunopeptidomics)研究领域,由于样本的复杂性以及方法的限制,往往需要大量的细胞。这篇文章的作者,优化了实验方法,从而可以利用少量的细胞鉴定HLA-DR绑定的肽段。
作者采用的细胞包含Epstein-Barr-永生型B细胞以及来自肉状瘤患者支气管肺泡灌洗液中的细胞。优化的步骤包括细胞裂解,HLA-DR免疫沉淀,HLA-DR绑定肽段的洗脱,除盐,肽段浓缩,以及质谱鉴定和肽段过滤。
作者最终在EBV-B细胞中鉴定了507个肽段(来自75个蛋白),在BAL 样品中鉴定了1434个肽段(来自215个蛋白),平均每100万个细胞可以鉴定10.1个肽段。相比前人的研究结果,该实验的鉴定结果提高了1-2个数量级。 |