Simple, scalable, and ultrasensitive tip-based identification of protease substrates
Gerta Shema, Minh T. N. Nguyen, Fiorella A. Solari, Stefan Loroch, A. Saskia Venne, Laxmikanth Kollipara, Albert Sickmann, Steven H. L. Verhelst and Rene P. Zahedi
Molecular & Cellular Proteomics, (2018) 17 826-834
本文提出了一种新的鉴定在不同蛋白质底物上蛋白酶作用形成的新的N-末端的方法。揭示了有关调控蛋白质分解网络在健康和疾病方面的信息。该方法基于N端肽段富集,接下来用质谱进行定性及定量。
这个方法,在吸管尖或ChaFRAtip基于电荷的分级对角线色谱法,是利用大家熟知的蛋白质化学并进行最小化的设备:一个带有纤维素的吸头,强阳离子交换珠和常见缓冲液。与iTRAQ-8标试剂配合,这个方法可以对8组样品超过2000个N末端肽段进行定量,每个条件/通道使用4μg蛋白。
作者将原来的LC/MS方法与通过十字孢碱诱导sh-SY5Y细胞凋亡的ChaFRAtip方法进行了比较。他们得到了两种方法相似的技术重现性,在1%FDR的条件下定量了975±24(HPLC)和783±71(Tips) 条unique的 N末端肽。
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