Intact Transition Epitope Mapping - Targeted High-Energy Rupture of Extracted Epitopes (ITEM-THREE)
Bright D. Danquah, Claudia Rower, Kwabena F. M. Opuni, Reham El-Kased, David Frommholz, Harald Illges, Cornelia Koy and Michael O. Glocker
Molecular & Cellular Proteomics, 18 1543-1555 (2019)
文章开发了一种直接使用nano ESI离子源进行抗体或抗原表位决定簇鉴定的方法。这个过程大致为:胰蛋白酶酶解抗原,之后多肽产物与抗体孵育1小时,最后样品直接通过电喷雾进入质谱仪器。
此技术的关键难点在于:在第一个四极杆通过5000 m/z卡值的设置,将没有结合抗体的肽段过滤掉;通过碰撞能量将抗原肽和抗体解离;这些抗原肽通过离子淌度进行分离,随后进行碎裂,最后使用TOF分析采集质谱图。
他们把含有抗原簇的合成多肽与antiTRIM21和antiRA33混合孵育来验证此方法。之后,他们又从酶解后的人重组TNF和antiTNFα抗体中鉴定到两个之前未报道过的抗原表位肽段。
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