Optimal Collision Energies and Bioinformatics Tools for Efficient Bottom-up Sequence Validation of Monoclonal Antibodies
Agnes Revesz, Tibor Andras Rokob, Dany Jeanne Dit Fouque, Daniel Huse, Viktor Hada, Lilla Turiak, Antony Memboeuf, Karoly Vekey and Laszlo Drahos
Analytical Chemistry 91 13128-35 (2019)
本文作者开发了一个名为Serac的软件,能够自动计算和报告来自Mascot对LC-MS/MS数据处理得到的蛋白质“可靠的序列覆盖率”(Confirmed sequence coverage, CSC)。
他们分析了两种用于治疗的单抗酶解产物(利妥昔单抗和曲妥珠单抗),并且绘制了肽段和蛋白CSC之间的碎裂能量曲线,以便发现最优的设置。他们还研究了通过结合来自多个来源的信息(例如,不同价态的多个谱图,在不同设置下采集的多个质谱数据)和多个水平(肽、氨基酸、片段离子)来增加CSC。
他们建议,一个最佳的工作流应该包括2-3个LC-MS/MS(碰撞能量在6-10ev之间),这样可以在碎片离子水平上进行组合。相比只有一个MS run并且也没有专门的数据处理流程相比,这个研究可以提高可靠的序列覆盖率约25%-30%以上。
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