In-Line Sample Processing System with an Immobilized Trypsin-Packed Fused-Silica Capillary Tube for the Proteomic Analysis of a Small Number of Mammalian Cell
Kosuke Hata, Yoshihiro Izumi, Takeshi Hara, Masaki Matsumoto, and Takeshi Bamba
Analytical Chemistry 92 2997-3005 (2020)
文章作者开发了一种用于用少量哺乳动物细胞制备蛋白样品的方法。该方法酶解效率高且蛋白损失少。这是一种联用nano-LC/MS/MS分析系统的,高效的在线细胞蛋白组学样品制备方法。
该装置通过显微操作器和nano注射泵连通到一个熔融石英毛细管。工作时,先抽吸裂解液,然后吸HeLa 细胞血液,最后进入毛细管。 假设HeLa细胞悬液浓度为200细胞/µl,吸取5nl即一个细胞,吸取50nL即10个细胞,以此类推。细胞数量会通过显微计数再次确认。
这些细胞接下来会被洗脱,裂解并被固定的trypsin酶酶解。多肽先被富集在nano-LC柱子的顶端,再进入LC/MS/MS分离分析系统。使用此方法,他们分别在100个细胞,10个细胞和单个细胞鉴定到了1351,351,和60个蛋白。
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