Shotgun proteomics of SARS-CoV-2 infected cells and its application to the optimisation of whole viral particle antigen production for vaccines
Lucia Grenga, Fabrice Gallais, Olivier Pible, Jean-Charles Gaillard, Duarte Gouveia, Helene Batina, Niza Bazaline, Sylvie Ruat, Karen Culotta, Guylaine Miotello, Stephanie Debroas, Marie-Anne Roncato, Gerard Steinmetz, Charlotte Foissard, Anne Desplan, Beatrice Alpha-Bazin, Christine Almunia, Fabienne Gas, Laurent Bellanger, Jean Armengaud
bioRxiv doi: 10.1101/2020.04.17.046193
作者开发了一种鸟枪法蛋白组学工作流程来指导病毒扩增条件的优化。他们还分析了感染后的宿主细胞蛋白质组,概述了病毒调控的生物学过程。
Vero E6细胞在两个感染水平上感染SARS-CoV-2,并用串联质谱法监测几天的感染动力学。鉴定到了3220种Vero细胞蛋白和6种SARS-CoV-2蛋白。在鉴定出的病毒蛋白中,3种为结构蛋白,3种为非结构蛋白。
为了评估LC-MS/MS所获得的病毒图谱在多大程度上反映了病毒的产生,他们在相对应的时间点通过定量PCR分析检测了SARS-CoV-2 病毒的RNA分子。蛋白质水平的改变反映了SARS-CoV-2病毒 RNA分子数量的变化,证实用label-free定量的LC-MS/MS方法可以用于监测SARS-CoV-2病毒感染动力学。
|
|