Zirconium(IV)-IMAC Revisited: Improved Performance and Phosphoproteome Coverage by Magnetic Microparticles for Phosphopeptide Affinity Enrichment
Ignacio Arribas Diez, Ireshyn Govender, Previn Naicker, Stoyan Stoychev, Justin Jordaan, and Ole N. Jensen
J. Proteome Res. 2021 20(1) 453-462
作者研究了溶剂条件对蛋白质酶解产物中磷酸化肽富集的影响。他们将Zr-IMAC磁性微粒与Ti-IMAC和TiO2在6种不同的羟基酸溶液中的富集性能进行了比较,并用LC-MS/MS对保留下来的肽段进行了表征。
通过自动化的磷酸肽富集和LC - MS/MS对人HepG2/C3A细胞的胰蛋白酶酶解产物最佳富集方法(Solvent2/Zr-IMAC、Solvent3/Ti-IMAC和Solvent1/ TiO2)进一步评估。在此条件下,Zr-IMAC比Ti-IMAC(4072)和TiO2(2744)提取出更多的磷酸肽(4624)。
S2/Zr-IMAC、S3/Ti-IMAC和S1/TiO2富集方法共鉴定出5173个磷酸化肽段。几乎一半的磷酸肽(44%)可以被三种方法重现(2278)。S2/Zr-IMAC获得最多的方法特异磷酸肽(829个),占总数的16%。
然后他们将这些方法与标准的基于LC的Fe-IMAC方法进行了比较。虽然鉴定出的总肽数相似,但磁微粒富集的选择性要高得多,超过90%的总肽被归属为磷酸化肽,而Fe-IMAC高效液相色谱法的富集选择性仅为78%。
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