Evaluation and refinement of sample preparation methods for extracellular matrix proteome coverage
Maxwell C. McCabe, Lauren R. Schmitt, Ryan C. Hill, Monika Dzieciatkowska, Mark Maslanka, Willeke F. Daamen, Toin H. van Kuppevelt, Danique J. Hof, Kirk C. Hansen
Molecular & Cellular Proteomics Published online April 9, 2021
细胞外基质(ECM)提供结构支架和介导信号转导,对于蛋白质组学研究人员来说是个公认的挑战,因为它的溶解性差,又有很多修饰,蛋白质提取过程也很困难。
在这项研究中,作者评估了在保留ECM蛋白的情况下用去细胞化方法提取细胞蛋白的能力,同时使用整个小鼠样本和另外四个器官。他们研究了五种广泛使用的去细胞化方法,四种ECM提取方法,以及四种单次提取和分析方法。此外,他们对14组条件下的羟胺酶解方法进行了优化。
他们发现,为了获得最佳的ECM覆盖率,推荐使用"Gnd-HCl/HA"提取方案,因为它能产生最多的PSM,并且核心基质体蛋白的序列覆盖率最高。然而,他们的结论是,去细胞化方法的选择应基于特定的项目分析目标或者优先级来考虑,比如更深度的蛋白质组覆盖率,或集中于胶原蛋白或糖蛋白分析。
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