Identifying glycation hot-spots in bovine milk proteins during production and storage of skim milk powder
Inge Gazi, Vojtech Franc, Sem Tamara, Martine P. van Gool, Thom Huppertz, Albert J.R. Heck
International Dairy Journal, 129 105340 (2022)
牛奶加热虽然是出于安全需求,但也可能产生潜在的免疫原性和异体糖基化。为了更好地了解这些物质的结构,作者研究了脱脂奶粉生产和储存过程中的蛋白质糖基化。
采用ETD和EThcD联用质谱法对加热牛奶、鲜奶粉和陈年奶粉中的完整蛋白质进行分析。该数据库包含6种高丰度牛乳蛋白和一系列的蛋白质异构体,包括最常见的基因突变和荷兰荷斯坦-费氏奶牛主要乳蛋白可能发生的磷酸化修饰。对于每个蛋白变体,大部分糖化蛋白质量数在1-12个己糖残基范围内。
四个样品还使用LC-MS/MS方法进行了肽谱分析,使用胰蛋白酶、糜蛋白酶、GluC、AspN和几种酶的组合酶解样品。最容易糖基化的两个蛋白是αs2 -酪蛋白和β-乳球蛋白,对于陈化奶粉,每一个αs2 -酪蛋白分子可以检测到多达5个乳糖残基。
这两个蛋白的糖基化位点多达9个,其中β-乳球蛋白的Lys141残基和αs2 -酪蛋白的Lys173残基在加热牛奶中的比例分别为37%和100%。作者还证实,在含量最高的牛乳蛋白中,糖基化赖氨酸残基通常前面有一段带正电的氨基酸,而C端是主要是一段脂肪族和疏水氨基酸。
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