Bioinertization of nanoLC/MS/MS systems by depleting metal ions from the mobile phases for phosphoproteomics
Yumi Komori, Tomoya Niinae, Koshi Imami, Jun Yanagibayashi, Kenichi Yasunaga, Shinya Imamura, Masami Tomita, Yasushi Ishihama
Molecular & Cellular Proteomics, in press, 2023
作者们开发了一种方法,通过将金属离子对峰形失真和信号强度降低的影响最小化来改善磷酸化肽段的分析。该方法还可以消除一些可能抑制电离并引起非必要沉淀的添加剂的影响。
约3600种不同的磷酸化肽段被用作模型底物,以研究金属离子对微量样品中蛋白质磷酸化定量的影响。磷酸化肽段通过填充TiO2磁珠的羟基酸修饰的金属氧化物色谱法从HeLa细胞提取物的酶切样本中富集而来。作者分别测试了肽段溶液在不锈钢、钛和PEEK三种常见色谱材料上的吸附作用,并发现多重修饰的磷酸化肽段在不锈钢和钛填充材料中,回收率分别降低了4.3倍和5.4倍,而从PEEK中回收率接近100%。当溶剂过泵之后,他们发现金属离子的影响受到显着抑制,而不过泵的溶剂没有这种效果。
他们测试了离线螯合树脂柱,发现对金属离子的去除有效。因此,尝试开发了一种在线金属离子去除系统,使用螯合树脂柱制备Empore亚胺基乙酸酯固定化膜片并将其插入PEEK联合件中,然后将其放置在nanoLC泵和样品注射器之间。在线装置的下游使用无金属PEEK和熔融硅玻璃毛细管。磷酸化肽段的峰面积通过在线金属离子去除装置平均增加了9.9倍,而对于多重磷酸化肽段,峰面积平均增加了77倍。
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