High-Throughput Venomics
Julien Slagboom, Rico J. E. Derks, Raya Sadighi, Govert W. Somsen, Chris Ulens, Nicholas R. Casewell, and Jeroen Kool
J. Proteome Res. 2023, published online: April 3, 2023
虽然蛇咬伤对我们许多人来说是非常罕见的事件,但由于缺乏低价且有效的抗蛇毒血清,每年仍然有13.8万人死于蛇毒。为了协助下一代抗蛇毒血清的开发,作者优化并验证了一种用于鉴定医学相关蛇毒毒素组成的自动分析程序。
首先,通过UV在液相分离时对毒液进行半定量。然后,从intact MS分析中初步确定毒素分类。LC流动相分离洗脱毒液蛋白,然后干燥、用胰蛋白酶进行自动化蛋白酶切。LC-MS/MS快速液相梯度每天可完成100个酶解样本的采集分析,可以在不到两天的时间内对单个蛇毒样本进行完整的蛋白质组学分析。
Mascot Daemon协助完成自动化质谱数据搜库和蛋白定性。配合一系列内部创建的R脚本,完成数据的编译和排序。该脚本创建了一种蛋白质评分色谱图(PSCs),该图由蛋白质打分与保留时间绘制,其中蛋白质打分位于Y轴上。整合PSCs中的峰以得到毒素的半定量信息,并与intact MS数据相关联。
作者完成了11种蛇毒的测试和鉴定,并得出结论,其新的工作流程比迄今为止文献中描述的任何其他毒液蛋白质组的鉴定方法都要快几个数量级。
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