Universal Identification of Pathogenic Viruses by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry Proteotyping
Clément Lozano, Olivier Pible, Marine Eschlimann, Mathieu Giraud, Stéphanie Debroas, Jean-Charles Gaillard, Laurent Bellanger, Laurent Taysse, Jean Armengaud
Molecular & Cellular Proteomics, published online July 29, 2024
作者开发了一种用于样品中非靶向病毒识别的方法。该方法通过使用磁珠从唾液样本中提取蛋白质,然后进行酶解和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析。
作者使用 Mascot 搜索引擎和级联搜索进行分类识别。第一轮中,选择了最优的 10,000 个 MS/MS 谱图,并使用 NCBInr 数据库的一个子集搜库。该子集包含 50,995 个物种,每个物种有一个代表(494 个古菌,2231 个真核生物,12,047 个细菌和 36,223 个病毒)。在第二轮中,数据库缩小至第一轮中鉴定出的属及其所有后代,并使用该缩小的数据库对所有 MS/MS 谱图进行搜索。最后一轮是将所有 MS/MS 谱图再次搜索到经过第二轮搜索后确定的物种组成的数据库中。
作为概念验证,作者使用获得的来自感染者的病毒制备的公开可用的 shotgun 蛋白质组学数据集对该方法进行了评估。成功识别出 53 个公共数据集,涵盖了 23 种不同的病毒物种。从四名健康捐赠者处采集的唾液样本中加入了痘苗病毒,并使用该方法进行分析,结果显示所有样本中均检测到了病毒,且无假阳性。该方法还能够区分三种密切相关的甲病毒,即 Pixuna 病毒、Rio Negro 病毒和 Sindbis 病毒。总体而言,该方法的灵敏度为 87.9%,特异性为 79.6%。
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